沙门菌属pad蛋白的原核表达及抗原性的鉴定

• 作者: 何君 刘慧莹 卢永峰 宋立华 左庭婷 朱虹 檀华 端青 陈超
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 沙门菌属 pad蛋白 原核表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 593-595
• 分类号: Q939.1
• 字数: 2899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2011.08.008

摘要

目的 在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体.方法 利用PCR方法从肠炎沙门菌中扩增出pad基因,构建pET-32a(+)-pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导温度和诱导时间以诱导重组蛋白的表达;以纯化的pad蛋白免疫家兔,制备抗pad多克隆抗体并进行鉴定.结果 与结论 成功扩增得到pad基因,经双酶切和测序证实重组表达质粒构建成功,经过诱导条件的优化,在大肠杆菌中表达出相对分子质量为41×103的目的 蛋白;纯化的重组蛋白免疫家兔后,能够有效地刺激家兔产生特异性抗体,经琼脂糖双向扩散测定抗血清效价达到1∶32以上.为进一步研制沙门菌属体外快速检测试剂打下了基础.