Stxl-A亚单位的原核表达、复性及抗原性鉴定

• 作者: 单云峰 史智扬 吴涛 唐震 崔仑标 戚宇华 曾晓燕 汪华 焦永军 葛以跃
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠埃希菌O157 志贺样毒素 质粒的构建与鉴定 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 319-322
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3812字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2008.04.009

摘要

目的 构建志贺毒素1-A亚单位(Stxl-A)原核表达质粒,使其在大肠埃希菌中表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其抗原性及应用价值.方法 以大肠埃希菌0157 DNA为模板扩增Stxl-A基因,重组克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌B121(DE3),异丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,包涵体经镍柱柱上复性和纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定.结果 重组质粒经双酶协鉴定和测序分析后证实构建成功.重组蛋白经十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,其表达量占细菌总蛋白量的15%左右,主要以包涵体形式存在,通过镍柱柱上复性获得纯化的可溶性Stxl-A蛋白,纯度达95%以上,Western印迹检测显示特异性条带.结论 成功构建了pET32a(+)/Stxl-A重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Stxl-A蛋白,为进一步制备抗Stxl-A抗体和研究其生物学功能奠定了基础.