猪源牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 丛雁方 张建武 张荣 文心田 袁世山 邓宇 郑浩
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪源牛病毒性腹泻病毒 实时荧光定量RT-PCR TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1046-1050
• 分类号: S854.43|S852.659.6
• 字数: 3741字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在建立一种荧光定量PCR检测方法,用于猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDVs)检测,同时能鉴别诊断猪瘟病毒(CSFV).根据BVDVs与CSFV 5 '-UTR保守序列,设计一套引物和特异TaqMan探针,以本实验室构建的猪源BVDVs 5′-UTR阳性重组质粒为标准品,通过优化反应条件,建立了标准曲线.以构建的标准品为模板进行了特异性、敏感性、重复性试验、并应用于临床检测.结果显示,该方法检测CSFV、猪繁殖与呼吸综合征病毒均为阴性；最低可检测到每个反应相当于10拷贝的标准品DNA；重复性试验的批内变异系数为0.20％～0.95％；应用所建立方法对临床样品进行检测,其结果与普通RT-PCR结果的符合率为86.7％.本研究建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于猪感染BVDVs、猪瘟疫苗污染BVDVs的监测.