烟曲霉硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的原核表达及抗原性分析

• 作者: 史利宁 孔小祥 李芳秋 王仕钦 邵世和 邵海枫 陆静芬 黄梅
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 烟曲霉 硫氧还蛋白还原酶 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 599-601
• 页数: 3页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)基因并构建原核表达载体,获得烟曲霉TR重组蛋白,并鉴定其抗原性.方法 用RT-PCR方法从烟曲霉总RNA中扩增出TR cDNA片段,克隆至pMD18-T载体,并转化EcoliJM109.经序列分析证实后,提取重组克隆质粒双酶切获得目的基因,与表达载体pET28a(+)连接,转化Ecoli BL21( DE3),筛选重组表达质粒.用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白表达,用SDS-PAGE及免疫印迹法分析重组蛋白质,并用亲和层析柱进行纯化.结果 构建了含TR全长基因的重组表达质粒,IPTG诱导后可高效表达.免疫印迹结果表明该重组蛋白质可被侵袭性曲霉病患者血清识别.结论 成功构建了重组表达质粒pET28a(+)/TR,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,重组蛋白质具有良好的抗原性,为进一步研究奠定了基础.