pcDNA3.1/ASIC1a真核表达载体的构建及其在佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞中的表达

• 作者: 吴繁荣 江晟 沈际佳 王念 胡伟 荣超 陈飞虎
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 关节炎,实验性 软骨细胞 脂质体 转染
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 514-518
• 分类号: R593.22|R394|R341
• 字数: 4372字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2011.06.003

摘要

目的 通过构建真核表达pcDNA3.1/ASIC1a质粒,转染佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨细胞,建立酸敏感通道在关节软骨细胞中过表达的模型,观察ASIC1a mRNA及其蛋白的相对表达.方法 通过PCR扩增目的 基因ASIC1a,并用XbaⅠ和BamHⅠ进行双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pcDNA3.1,将其酶切产物按常规方法连接并转化入大肠杆菌,挑去菌落培养,提取质粒,进行酶切鉴定及测序,然后用Lipofectamine 2 000转染试剂盒将所构建质粒转染入关节软骨细胞,使用荧光定量PCR、RT-PCR和Western blot法检测ASIC1a mRNA和蛋白表达,以鉴定模型建立成功与否.结果 ① 通过对大鼠脑组织RNA的提取及逆转录,获得ASIC1a基因,并与载体连接,通过大肠杆菌培养,获得足够多的实验用转染质粒,经酶切鉴定包含目的 基因,且酶切条带准确清晰.② Lipofectamine 2 000细胞转染后,获得稳定阳性克隆细胞,通过对ASIC1a mRNA及其蛋白相对表达量进行检测,表明转染后细胞mRNA及蛋白量表达均相对上升.结论 成功构建了pcDNA3.1/ASIC1a重组表达载体,并用于观察酸敏感离子通道表达水平对关节软骨细胞代谢的影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡伟	安徽医科大学第二附属医院药剂科	72	503	12.0	16.0
2	荣超	安徽医科大学药学院	5	33	3.0	5.0
3	陈飞虎	安徽医科大学药学院	211	2068	22.0	32.0
4	吴繁荣	安徽医科大学药学院	49	544	14.0	20.0
5	沈际佳	安徽医科大学基础医学院	84	364	10.0	14.0
6	王念	安徽医科大学药学院	3	15	2.0	3.0
7	江晟	安徽医科大学药学院	4	15	3.0	3.0