pEGFP-C2-ASIC2 a真核表达载体的构建及其在大鼠关节软骨细胞中的表达

• 作者: 倪文琳 唐杰 潘春晓 葛金芳 陈飞虎
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: ASIC2a pEGFP-C2 软骨细胞 基因表达 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 304-308
• 页数: 5页
• 分类号: R593.22
• 字数: 3453字
• 语种: 中文

摘要

目的通过构建真核表达pEGFP-C2-ASIC2a质粒,转染大鼠关节软骨细胞,建立ASIC2a在关节软骨细胞中过表达的模型,观察 ASIC2a mRNA及其蛋白在细胞中的表达。方法从大鼠脑组织中提取目的基因ASIC2a,并用EcoR玉和Kpn玉进行双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pEGFP-C2,将其酶切产物按常规方法连接并转化入大肠杆菌DH5a,挑单克隆菌进行培养,提取质粒,再通过双酶切鉴定及测序后,用Lipofectamine 2000将所构建质粒转染入关节软骨细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,使用RT-PCR和Western blot法检测ASIC2a mRNA和蛋白表达,以鉴定模型建立成功与否。结果进行双酶切鉴定目的条带清晰准确,转染后可在荧光显微镜下观察到绿色荧光表达,通过RT-PCR可发现mRNA转录,Western blot法可发现目的蛋白表达。结论成功构建重组pEGFP-C2-ASIC2a表达载体,将用于进一步观察ASICs对软骨细胞的影响。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	葛金芳	安徽医科大学药学院	73	898	14.0	28.0
2	陈飞虎	安徽医科大学药学院	211	2068	22.0	32.0
3	潘春晓	安徽医科大学药学院	5	24	3.0	4.0
4	唐杰	安徽医科大学药学院	7	48	3.0	6.0
5	倪文琳	安徽医科大学药学院	2	22	1.0	2.0