转KAP6.1-GFP-蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S绵羊成纤维细胞株的筛选

• 作者: 原璐 吴治昊 宁方勇 安铁洙 朴善花 王春生
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 蜘蛛拖丝蛋白基因 角蛋白启动子 真核表达载体构建 绵羊成纤维细胞 转基因
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 畜牧·资源昆虫
• 页码范围: 2561-2566
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.12.019

摘要

[目的]通过体细胞核移植为获得皮肤特异表达蜘蛛拖丝蛋白的绵羊莫定基础.[方法]将pcDNA3.1和带有角蛋白结合蛋白启动子质粒pGM-T-KAP6.1分别用Bg1 Ⅱ和Hin d Ⅲ双酶切后连接,再与蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S连接,最后通过酶切与pIRES2-EGFP质粒连接后构建真核表达载体pIRES2-EGFP-4S;将此载体线性化后,采用脂质体法转染绵羊皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因阳性细胞.[结果]筛选得到转pIRES2-EGFP-4S的阳性细胞.对阳性细胞经体外培养后的检测显示:(1)细胞形态(长梭形)、细胞生长曲线(呈S形)、群体倍增时间(随培养时间增加逐渐缩短)和细胞接种率(细胞贴壁率及存活率在24 h内逐渐升高,并达到最高值125%)等均具有正常绵羊成纤维细胞的生物学特征;(2)阳性细胞经冷冻复苏后具有与新鲜阳性细胞相似的生物学特征;(3)PCR检测结果显示,pIRES2-EGFP-4S在阳性细胞的基因组中整合.[结论]获得具有在绵羊皮肤特异表达,且便于检测的转蜘蛛拖丝蛋白4S的绵羊成纤维细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宁方勇	东北林业大学生命科学学院	40	122	5.0	9.0
3	安铁洙	东北林业大学生命科学学院	75	199	8.0	10.0
4	王春生	东北林业大学生命科学学院	61	134	7.0	9.0
5	朴善花	东北林业大学生命科学学院	53	94	5.0	7.0
8	原璐	沈阳医学院何氏视觉科学学院	1	3	1.0	1.0
9	吴治昊	东北林业大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0