香蕉条斑病毒云南分离物ORFⅠ的原核表达及其抗血清制备

• 作者: 余乃通 刘志昕 张雨良 杨文君 林湛松 王健华
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 香蕉条斑病毒 原核表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 作物病虫害及防治
• 页码范围: 1356-1359
• 分类号: S668.1
• 字数: 4093字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2011.07.033

摘要

以连接在pMD-18T载体上的香蕉条斑病毒云南分离物(BSV)全基因组为模板,设计特异引物,PCR扩增获得ORFI全长序列.目的片段及原核表达载体pET32(b)分别经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,连接构建重组质粒pET32-ORF Ⅰ,将鉴定为正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得原核表达OFR Ⅰ工程菌.工程菌在28℃条件下,用浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导表达6h,离心收集菌液并超声波破碎,获得以含目的肽段的可溶性蛋白为主的融合蛋白.将融合蛋白通过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,得到纯度较高的融合蛋白.以此蛋白为抗原免疫家兔,获得特异抗血清,该抗血清的效价达1∶100000,Western Blot验证表明,抗血清的特异性较强.本研究为BSV的快速检测以及BSV编码蛋白的功能研究奠定了基础.