肠道病毒71型VP1基因的表达纯化及初步应用

• 作者: 刘元帅 刘旺根 孙新城 张曼莉 昌静峰 李玉林 王云龙 王国强 王继创 秦贵军 董彩文
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肠道病毒71 VP1 表达 纯化 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2011,（14）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 1849-1851
• 分类号: R512.5
• 字数: 3107字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2011.14.024

摘要

目的 表达纯化肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白,初步建立人血清中抗EV71 IgG间接ELISA检测方法.方法 通过化学法合成肠道病毒71型VP1全基因序列,构建重组质粒pET-43.1a(+)/VP1,转化大肠杆菌BL21(DE)3,IPTG诱导表达,镍金属亲和层析纯化目的蛋白,产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定.以目的蛋白作为包被抗原,初步建立间接ELISA检测方法,并对77份6～10岁无手足口病症状儿童血清及手足口病现症患儿血清进行检测.结果 成功构建重组质粒pET-43.1a(+)/VP1,VP1融合蛋白分子量约为43 kD,纯度可达95%;初步建立了人血清中抗EV71 IgG间接ELISA 检测方法,36例HFMD现症患儿中EV71 IgG阳性22例(61.11%);41例无手足口症状儿童血清中 EV71 IgG阳性21 例(51.22%).结论 表达产物具有较好的免疫原性,可用于肠道病毒71抗体检测.