应用酵母双杂交技术筛选与乙型肝炎病毒x抗原结合蛋白1结合的肝细胞蛋白编码基因

• 作者: 刘小静 张树林 成军 樊万虎 王琦
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 XBP1 酵母双杂交系统 蛋白质相互作用
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 990-992
• 分类号: R512.6|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的:构建乙型肝炎病毒x抗原结合蛋白1( XBP1)的真核表达载体并筛选人肝细胞中与XBP1相互作用的基因.方法:通过PCR扩增获得XBP1基因,构建真核表达载体pGBKT7-XBP1,转化酵母菌AH109并在其中进行表达.随后与预转化了人肝细胞文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-β-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行双重筛选获得阳性克隆.提取文库质粒pACT2-DNA并与pGBKT7-XBP1共同转化AH109酵母菌株,于铺有X-β-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行筛选以排除假阳性克隆.挑取真阳性克隆送测序,并进行生物信息学分析.结果:筛选出20种与XBP1相互作用的蛋白,其中包括金属硫蛋白,平滑肌细胞相关蛋白,去唾液酸糖蛋白受体,丙酮酸脱氢酶激酶1,甜菜碱甲基转移酶,视黄醇结合蛋白,补体因子B、人补体C9,转化生长因子β1,丝氨酸蛋白酶抑制剂；cAMP应答元件结合蛋白,拓扑异构酶Ⅱβ等已知功能基因及1个未知功能序列.结论:筛选到多种XBP1相互作用的基因,包括与细胞内结构、细胞生长相关蛋白基因,参与细胞内代谢的蛋白基因,参与信号转导途径、免疫及其他相关蛋白基因,参与DNA的复制、转录、重组、修复的基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	成军	北京地坛医院传染病研究所	210	843	13.0	20.0
2	张树林	西安交通大学医学院第一附属医院感染科	76	619	13.0	23.0
3	刘小静	西安交通大学医学院第一附属医院感染科	34	53	4.0	5.0
4	王琦	北京地坛医院传染病研究所	29	36	3.0	4.0
5	樊万虎	西安交通大学医学院第一附属医院感染科	16	59	3.0	7.0