转化生长因子-β3基因重组腺病毒载体的构建及表达

• 作者: 吴清华 李明勇 肖军 邱林
• 来源期刊: 重庆医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 转化生长因子-β3基因 增强型绿色荧光蛋白 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 668-672
• 分类号: Q953.5
• 字数: 5358字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-3626.2012.08.004

摘要

目的:构建含有转化生长因子-β3 (Transforming growth factor-β3,TGF-β3)和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒载体,使其转染兔骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),并在细胞内得到表达.方法:将含有TGF-β3基因克隆至含有EGFP的穿梭质粒,通过在感受态菌DH5α内同源重组,构建pAdxsi-EGFP-TGF-β3.PacⅠ酶切线性化pAdxsi-EGFP-TGF-β3转染HEK293细胞,多轮“乒乓感染法”扩增收集pAdxsi-EGFP-TGF-β3病毒液,氯化铯梯度离心纯化,PCR和荧光显微镜观察EGFP的表达并检测重组腺病毒液的滴度.测定重组腺病毒液转染MSCs细胞转染效率,Western blot检测TGF-β3蛋白表达.结果:成功构建携带TGF-β3和EGFP的重组腺病毒载体pAdxsi-EGFP-TGF-β3,PCR和绿色荧光证实病毒包装成功,并具有感染力,病毒滴度为2×1010 pfu/ml.Western blot检测表明Adxsi-EGFP-TGF-β3感染的兔骨髓MSCs细胞有效表达TGF-β3.结论:含有TGF-β3和EGFP的腺病毒载体pAdxsi-EGFP-TGF-β3构建成功和TGF-β3蛋白在兔骨髓MSCs中有效表达,为进一步研究转染TGF-β3基因的兔骨髓MSCs减轻创面愈合后瘢痕组织增生提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱林	重庆医科大学附属儿童医院烧伤整形科	60	367	11.0	17.0
2	肖军	重庆医科大学附属儿童医院烧伤整形科	30	139	8.0	11.0
3	李明勇	重庆医科大学附属儿童医院烧伤整形科	6	50	4.0	6.0
4	吴清华	重庆医科大学附属儿童医院烧伤整形科	3	32	3.0	3.0