泡桐MSAP体系建立及引物筛选

• 作者: 曹喜兵 范国强 赵改丽
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 泡桐 MSAP 反应体系 引物筛选
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 林业科学
• 页码范围: 535-541
• 页数: 7页
• 分类号: S792.43
• 字数: 4766字
• 语种: 中文

摘要

以豫杂一号泡桐组培苗为材料,通过对影响MSAP反应体系各主要因素的优化,建立了适于泡桐MSAP分析的反应体系.结果表明,最佳酶切体系(25 μL)包含300 ng模板DNA,16 U的EcoR Ⅰ和10 U的Hap Ⅱ(MspⅠ),各双酶切8h后,80℃失活20 min；最佳连接体系(25 μL)是酶切产物20 μL,0.16 μmol·L-1 EcoR Ⅰ接头,1.6 μmol· L-1 HapⅡ(MspⅠ)接头,2.5 μL 10×T4 Buffer,2UT4连接酶,22℃连接18 h；最佳预扩反应体系(20 μL)是5μL稀释10倍的连接产物,100μmol·L-1 dNTP,0.5 U Taq酶,EcoR Ⅰ和HapⅡ(MspⅠ)预扩引物各0.25 μmol·L-1,2.5 μL 10×PCR Buffer.最佳选择性扩增反应体系(20μL)为5 μL稀释30倍预扩增产物,100 μmol·L-1 dNTP,0.5 U Taq酶,EcoR Ⅰ和HapⅡ(MspⅠ)选扩引物各0.3 μmol·L-1,2.5μL 10×PCR Buffer.最后,利用优化的体系,筛选出了96对适宜于泡桐MSAP分析的引物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范国强	河南农业大学泡桐研究所	106	1402	22.0	31.0
2	赵改丽	河南农业大学泡桐研究所	12	71	7.0	8.0
3	曹喜兵	河南农业大学泡桐研究所	17	147	8.0	12.0