变异链球菌乳酸脱氢酶与霍乱毒素B亚单位嵌合表达质粒的构建和表达

• 作者: 刘建国 吴家媛 唐琳 张剑 张燕 管晓燕 陈筑 马欣荣
• 来源期刊: 牙体牙髓牙周病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 变异链球菌 乳酸脱氢酶 霍乱毒素B亚单位 原核表达质粒
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 371-374,406
• 页数: 5页
• 分类号: R780.2
• 语种: 中文

摘要

目的:构建含变异链球菌乳酸脱氢酶(LDH)和霍乱毒素B亚单位(CTB)嵌合原核表达质粒,并诱导表达融合蛋白.方法:应用PCR技术扩增LDH编码基因ldh和CT编码基因ctxB,定向克隆至原核表达质粒pET32a(+)上,通过限制性内酶切、PCR和序列测定分析鉴定后转化大肠杆菌BL21( DE3),并经IPTG诱导表达融合蛋白.结果:PCR扩增得到了ldh和ctxB;构建的质粒pET-LDH/CTB经Kpn I、Xho I双酶切和目的基因PCR检测,均得到1.4 kb大小的片段,与预计目的基因片段大小相同；质粒pET-LDH/CTB中插入的ldh序列与GeneBank中Idh比较同源性为98％,ctxB的同源性达99％,插入的相位正确；经IPTG诱导表达了约70×103的蛋白.结论:成功构建了变异链球菌LDH和CTB嵌合表达质粒pET-LDH/CTB,并正确表达融合蛋白.