短发夹状RNA抑制RhoA基因在HepG2细胞中的表达

• 作者: 吕小红 张晓梅 沈锦友
• 来源期刊: 临床消化病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 短发夹状双链RNA RhoA基因 肝癌细胞
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 14-16
• 分类号: R735.7
• 字数: 2760字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/lcxh.j.issn.1005-541X.2012.01.05

摘要

目的 构建针对人RhoA基因的短发夹状双链RNA(shRNA)真核表达载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2 RhoA表达的特异性抑制效应.方法 设计合成针对RhoA mRNA编码序列两个不同靶点的核苷酸片断,并定向克隆到真核表达载体Pgenesil-2的U6启动子下,构建重组质粒phsRNA- RhoA1和pshRNA- RhoA2,不针对任何基因组序列的重组质粒pshRNA- HK作为阴性对照.脂质体法转染到HepG2细胞后,应用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)和蛋白免疫印迹法( Western- blot)分别检测RhoA基因表达的抑制效应.结果 酶切鉴定和测序结果证实重组质粒均构建成功.转染HepG2后,pshRNA- RhoA2组RhoA基因mRNA和蛋白的表达水平均显著降低,与pshRNA-HK组和空白细胞组相比,差异有统计学意义(r=- 19.28,t=-7.08,P＜0.05).而pshRNA- RhoA1组抑制效应不明显,差异无统计学意义(r=-0.16,t=-0.30,P＞0.05).结论 构建的重组质粒pshRNA- RhoA2能特异有效地抑制RhoA基因在肝癌细胞HepG2中的表达,为进一步研究RhoA基因在肝癌中的作用提供了有效的分子工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕小红	武汉市第五医院消化内科	16	54	4.0	6.0
2	张晓梅	武汉市第五医院消化内科	9	25	2.0	5.0
3	沈锦友	武汉市第五医院消化内科	3	1	1.0	1.0