大鼠Uqcrfs1重组质粒的构建及其在HEK293T细胞中的表达

• 作者: 古艳婷 孙斯凡 李平 杨靖 王旭 王红盼 董晞 赵婷婷
• 来源期刊: 中国中西医结合肾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Uqcrfs1 重组质粒 糖尿病肾病
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 实验论著
• 页码范围: 103-106
• 分类号: R346
• 字数: 4029字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-587X.2012.02.004

摘要

目的:构建大鼠Uqcrfs1的重组质粒并检测其在人胚胎肾293T细胞中的表达.方法:应用RT-PCR方法从大鼠肾脏组织总RNA中扩增出编码Uqcrfs1的cDNA,克隆至pUM-T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,酶切鉴定及测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK 293T细胞,使用RT-PCR、Western Blot方法检测重组质粒在转录及蛋白水平的表达.结果:测序结果证实PCR扩增得到编码Uqcrfs1的cDNA序列正确;磷酸钙共沉淀法转染HEK 293T细胞后,在基因转录与蛋白表达水平,结果达到预期.结论:成功构建大鼠Uqcrfs1的重组质粒,该重组质粒可在HEK 293T中过表达.