比格犬ERβ1293基因真核载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达和定位

• 作者: 任秀梅 刘冰 孙兆增 曾林 杨焕民 甘艺 胡仲明 赵彦斌 钟睿 陈旖
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 比格犬 ERβ1293 蛋白定位 第4外显子缺失
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 7-10,15,后插1
• 页数: 6页
• 分类号: R33
• 字数: 3246字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969.j.issn.1671.7856.2014.002.002

摘要

目的 观察比格犬Myc 标签ERβ1293重组真核表达载体在HEK293T细胞中的表达及定位.方法 以pEGFP-N1-ERβ1293重组真核表达载体为模板,PCR保真酶扩增得到ERβ1293基因编码区全长.Myc标签ERβ1293重组真核载体瞬时转染HEK293T细胞,运用蛋白质印迹技术(Western blotting)和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence,IF)鉴定pcDNA3.1-Myc-ERβ1293在HEK293T细胞中的表达和定位情况.结果 成功构建pcDNA3.1-Myc-ERβ1293重组真核表达载体,转染至HEK293T细胞中.Western blotting检测有蛋白条带表达,共聚焦显微镜下观察IF处理后的转染细胞,荧光定位于细胞质.结论 前期实验得到比格犬ERβ剪切异构体ERβ1293编码区序列,缺失第四外显子,导致其与配体结合能力减弱或消失,因此目的 基因编码蛋白定位在细胞中发生变化.