鹅胆固醇7α-羟化酶基因克隆及原核表达

• 作者: 岳万福 杜雪 王晓杜 赵阿勇
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅 CYP7A1基因 分子克隆 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1559-1565
• 页数: 7页
• 分类号: S835|S813.1
• 字数: 5661字
• 语种: 中文

摘要

为进一步研究胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)在胆汁酸合成和胆固醇代谢过程中的调节机制,采用RT-PCR和RACE方法从鹅(Anser anser)肝组织克隆CYP7A1基因全长cDNA序列,亚克隆其CDS区并构建原核表达载体pET-28a-cyp7α1.重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导表达.经His-Bind纯化试剂盒纯化的His-CYP7A1免疫Bal b/c小鼠,制备小鼠抗鹅CYP7A1多克隆抗体,Western blotting验证His-CYP7A1免疫原性和抗体的特异性.序列分析结果表明,该蛋白与鸡、大鼠、人、短尾猊、小鼠的CYP7A1蛋白氨基酸序列同源性分别为93 ％、66％、67％、68％、66％.SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白His-CYP7A1得到正确高效表达,该His0CYP7A1分子质量约为59 ku,经纯化获得高纯度重组His-CYP7A1蛋白.制备了小鼠抗鹅CYP7A1多克隆抗体,效价达1∶104.Western blotting检测表明,该蛋白能够被小鼠抗His抗体和小鼠抗CYP7A1抗体所识别,小鼠抗CYP7A1多克隆抗体具有较好的特异性.试验结果为进一步研究CYP7A1基因结构和CYP7A1在鹅肝脏脂类代谢中的作用提供了基础和技术手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王晓杜	浙江农林大学动物科技学院	20	68	4.0	7.0
2	赵阿勇	浙江农林大学动物科技学院	20	44	4.0	6.0
3	岳万福	浙江农林大学动物科技学院	26	27	3.0	4.0
4	杜雪	浙江农林大学动物科技学院	2	9	2.0	2.0