兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白A(OmpA)重组蛋白单克隆抗体的制备及潜在应用

• 作者: 刘燕 季权安 庞安娜 肖琛闻 钱微 韦强 鲍国连
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 多杀性巴氏杆菌 外膜蛋白A(OmpA) 重组蛋白 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 676-681
• 分类号: S852.61
• 字数: 4488字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.06.012

摘要

制备兔多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)外膜蛋白A(OmpA)重组蛋白单抗,为兔多杀性巴氏杆菌病的诊断提供特异性强,灵敏度高的单克隆抗体.本研究选取并扩增Pm外膜蛋白基因OmpA,原核表达获得了的大小为37.6 kD的OmpA重组蛋白,以纯化复性的兔多杀性巴氏杆菌OmpA重组蛋白作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),取其脾细胞与SP2/0细胞融合,ELISA筛选出了4株分泌Pm OmpA蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为5D2、BC11、2A2和6A4.其中2A2细胞培养液效价为1∶256,5D2、BC11和6A4效价为1∶128;2A2腹水效价为1∶12 800,其余3株达1∶6 400.杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代,仍能稳定分泌高效价抗体.Western blot显示,4株单克隆抗体均能与Pm OmpA重组蛋白重组发生特异性反应.用ELISA方法鉴定2A2单克隆抗体亚型为IgG2b,ProteinA亲和纯化2A2腹水抗体,获得的单抗浓度为130 μg/mL.选取纯化的2A2单克隆抗体进行潜在应用研究,Western blot与间接免疫荧光结果显示,单克隆抗体能与兔多杀性巴氏杆菌分离菌株发生特异性反应.表明利用体外重组表达兔多杀性巴氏杆菌OmpA融合蛋白制成的杂交瘤能够稳定分泌效价高、特异性强的单克隆抗体,可用于兔多杀性巴氏杆菌诊断,本研究结果为兔多杀性巴氏杆菌诊断试剂盒的研制提供技术参数.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韦强	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	64	394	10.0	17.0
2	鲍国连	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	67	410	11.0	17.0
3	季权安	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	61	360	10.0	16.0
4	庞安娜	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	6	39	4.0	6.0
5	刘燕	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	43	210	7.0	12.0
6	肖琛闻	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	37	101	5.0	7.0
7	钱微	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	2	18	2.0	2.0