CP4-EPSPS蛋白在大肠杆菌中的表达与制备

• 作者: 刘德虎 刘树鹏 李刚强 王楠
• 来源期刊: 中国农业科技导报
• 学科: 生物学
• 关键词: CP4-EPSPS 蛋白表达 蛋白纯化 酶联检测
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术 生命科学
• 页码范围: 91-97
• 分类号: Q816
• 字数: 6202字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0864.2012.01.13

摘要

构建了一个含有CP4-EPSPS外源基因的细菌表达载体并在大肠杆菌Transtta菌株中的高效表达,通过SDS-PAGE检测发现,目标蛋白完全以可溶性方式存在于细胞破碎上清液中,且约占到细菌可溶性蛋白的40％左右.收集该上清液并进而通过连续2次镍柱亲和层析,CP4-EPSPS重组蛋白纯度可达99.9％以上,对其进行N端序列分析,与预期的结果完全一致.以其作为标准品,通过ELISA,成功检测出三株CP4-EPSPS转基因烟草中目标蛋白含量分别为0.292 μg/g、0.477 μg/g和0.703 μg/g.该蛋白表达和纯化体系可为CP4-EPSPS转基因植物蛋白量值溯源传递的标准物质研制提供稳定物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王楠	中国农业科学院生物技术研究所	27	138	8.0	10.0
2	李刚强	中国农业科学院生物技术研究所	16	78	6.0	8.0
3	刘德虎	中国农业科学院生物技术研究所	24	218	9.0	14.0
4	刘树鹏	中国农业科学院生物技术研究所	1	3	1.0	1.0