pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒的构建及其在活细胞内的作用

• 作者: 丁勇兴 杨清玲 陈昌杰 高艳军
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 受体,趋化因子/遗传学 趋化因子CXCL2 质粒 重组蛋白质类/遗传学 遗传载体 转染 遗传互补测验
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 519-526
• 分类号: R737.9
• 字数: 4619字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2012.05.009

摘要

目的:构建pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC 155-NT21MP真核表达质粒,利用双分子荧光互补( BiFC)技术,在活细胞内直接观察趋化因子受体4(chemokine receptor 4、CXCR4和CD184)与CXCR4抑制性多肽的相互作用.方法:应用化学合成法获得巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ(viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)N端21肽(N-terminal 21-mer peptide,NT21MP)编码的基因序列,克隆至经Kpn Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切的pBiFC-VC155中,筛选含有目标基因的正确克隆.利用RT-PCR扩增人乳腺癌细胞株SKBR3的CXCR4全长基因后,T-A亚克隆至经Kpn Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切的pBiFC-VN173载体中.然后,经酶切鉴定及DNA测序分析2个基因是否正确连接至真核表达载体中.应用脂质体转染的方法共转染pBiFC-VC155-NT21 MP和pBiFC-VC155-CXCR4至细胞株COS-7中,在荧光显微镜下观察NT21MP与CXCR4在胞内的相互作用.结果:经DNA测序及同源性对比,证实pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VN173-CXCR4重组栽体构建成功；基因片段与NCBI基因库vMIP-Ⅱ和CXCR4基因CDS序列同源性达99.9％.BiFC法观察NT21MP与CXCR4在细胞内结合出现的荧光信号,该信号分布细胞内.结论:本实验成功构建了应用BiFC技术的真核表达载体,并且在活细胞内检测到NT21MP与CXCR4的互相结合.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈昌杰	蚌埠医学院生化与分子生物学教研室	123	549	10.0	17.0
2	杨清玲	蚌埠医学院生化与分子生物学教研室	76	343	9.0	14.0
3	高艳军	蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心	5	28	4.0	5.0
4	丁勇兴	蚌埠市中心医院普外肿瘤科	10	50	5.0	6.0