Smad真核表达质粒构建及其在小鼠T淋巴瘤细胞中的表达

• 作者: 季然 李鑫宇 王婧帆 陈金铃
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: T淋巴瘤细胞 Smad蛋白 真核表达质粒
• 年，卷（期）: 2018,（21）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 9-12
• 页数: 4页
• 分类号: R733.4
• 字数: 3279字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2018.21.003

摘要

目的 构建并鉴定pcDNA3.1-Smad2、pcDNA3.1-Smad3及pcDNA3.1-Smad4真核表达质粒,探讨Smad在小鼠T淋巴瘤细胞(EL4)中能否稳定表达.方法 以EL4细胞cDNA为模板,PCR法获取转录因子Smad2、Smad3、Smad4 mRNA CDS区即目的基因片段;构建含有目的基因的T载体pMD19-T-Smad2、pMD19-T-Smad3、pMD19-T-Smad4;用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1载体、pMD19-T-Smad2,用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1载体、pMD19-T-Smad3及pMD19-T-Smad4,T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,扩大培养并提取重组质粒;通过PCR、双酶切及DNA测序等方法鉴定重组质粒.将构建好的pcDNA3.1-Smad2、pcDNA3.1-Smad3、pcDNA 3.1-Smad4电转入EL4细胞,72 h后用Western blotting法检测EL4细胞中目的蛋白的表达.结果 PCR和双酶切结果均提示重组质粒pcDNA3.1-Smad2、pcDNA3.1-Smad3、pcDNA 3.1-Smad4构建成功;测序结果确定插入片段无突变,序列完全正确.重组质粒pcDNA3.1-Smad2、pcDNA3.1-Smad3、pcDNA3.1-Smad4转入EL4细胞后上调目的蛋白Smad2、Smad3、Smad4蛋白的表达.结论 成功构建pcD-NA3.1-Smad2、pcDNA3.1-Smad3和pcDNA3.1-Smad4真核表达质粒;将Smad真核表达质粒成功转染入EL4细胞,诱导细胞内目的蛋白高表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈金铃	南通大学医学院病原生物学系	31	94	6.0	7.0
2	王婧帆	南通大学医学院病原生物学系	2	3	1.0	1.0
3	季然	南通大学医学院病原生物学系	1	0	0.0	0.0
4	李鑫宇	南通大学医学院病原生物学系	1	0	0.0	0.0