钙激活酶激活蛋白基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化

• 作者: 尹淑琴 常泓 朱宏 梁娟 范艳
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 钙激活酶激活蛋白 原核表达 条件优化
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 156-161
• 分类号: Q78
• 字数: 4059字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2012.02.012

摘要

构建钙激活酶激活蛋白基因(UK114)的原核表达载体并优化其表达条件,为其高效表达提供试验依据.以UK114 cDNA为模板,通过PCR方法扩增钙激活酶激活蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中,酶切及测序鉴定重组体.将构建好的重组质粒转化大肠埃希菌BL21 (DE3),用IPTG进行诱导表达,在保持菌种不改变的前提下,分别改变IPTG的浓度、培养时间、菌体浓度、培养温度等来优化表达条件.结果显示,原核表达载体pGEX-4T-3-UK114成功构建,可在大肠埃希菌BL21 (DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约40 kD的GST-UK114融合蛋白.在IPTG浓度为0.3 mmol/L,诱导温度为32℃,诱导时间为4h,菌体密度OD600为0.6的条件下,目的蛋白表达量最高.试验成功构建原核表达载体pGEX-4T-3-UK114且获高效表达,为研究UK114生物学活性及产品开发提供了试验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	常泓	山西农业大学生命科学学院	28	381	8.0	19.0
2	尹淑琴	山西农业大学生命科学学院	13	56	4.0	7.0
3	范艳	山西农业大学生命科学学院	7	44	3.0	6.0
4	朱宏	山西农业大学生命科学学院	6	19	2.0	4.0
5	梁娟	山西农业大学生命科学学院	11	63	4.0	7.0