鼠IFN-λ2腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 严玉兰 刘洋 步雪峰 袁利学
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 鼠 IFN-λ2 腺病毒载体 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 120-124
• 分类号: R393
• 字数: 3692字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2012.02.007

摘要

目的:构建鼠IFN-λ2重组腺病毒载体.方法:用人水疱口炎病毒诱导小鼠原代脾细胞表达IFN-λ2,通过RT-PCR 获取IFN-λ2 cDNA,将其亚克隆至pShuttle-CMV载体,经PmeⅠ线性化后,与腺病毒的骨架载体pAdEasy在BJ5183菌中同源重组,转染293A细胞包装扩增,RT-PCR检测重组腺病毒的目的基因,TCID50法对构建的腺病毒进行滴度测定.用鼠IFN-λ2重组腺病毒感染小鼠肺腺癌细胞,蛋白质印迹法检测细胞中IFN-λ2蛋白的表达,倒置显微镜观察鼠IFN-λ2重组腺病毒对鼠肺腺癌细胞生长的抑制作用.结果:成功克隆鼠IFN-λ2的cDNA,序列与基因库公布序列完全一致;经酶切鉴定表明成功构建鼠IFN-λ2重组腺病毒载体;重组腺病毒载体在293A细胞中成功包装及扩增;包装成功的重组腺病毒中含有目的基因,病毒滴度为2×1010pfu/ml;蛋白质印迹显示感染细胞的上清中有鼠IFN-λ2蛋白的表达,倒置显微镜显示感染的鼠肺腺癌细胞生长受到抑制.结论:成功构建了鼠IFN-λ2重组腺病毒载体,并能介导鼠IFN-λ2蛋白的表达进而抑制鼠肺腺癌细胞的生长,为进一步开展抗肿瘤研究及基因治疗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严玉兰	江苏大学附属人民医院呼吸科	39	108	5.0	8.0
2	刘洋	江苏大学附属人民医院呼吸科	45	226	7.0	12.0
3	步雪峰	江苏大学附属人民医院呼吸科	33	106	6.0	9.0
4	袁利学	黄石市中心医院重症医学科	1	1	1.0	1.0