融合蛋白IP10-EGFRvⅢScFv的构建及表达

• 作者: 周毅 姜晓兵 张方成 王旋 罗赤星 赵洪洋
• 来源期刊: 华中科技大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 表皮生长因子受体 γ干扰素诱导蛋白10 单链抗体 融合蛋白 构建 表达
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-6
• 分类号: R73
• 字数: 4538字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2012.01.001

摘要

目的 构建细胞因子融合蛋白IP10-EGFRvⅢScFv,建立并检测稳定表达融合蛋白的细胞株NIH3T3.方法 通过RT-PCR法扩增小鼠IP10基因,全基因人工合成EGFRvⅢScFv,两段 基因依次克隆于表达载体pcDNA3.1(-)PCMV启动子下游,二者以编码(Gly4Ser)3的柔性接头序列(linker)相连.将构建好的pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv转染NIH3T3细胞,并用G418筛选出阳性克隆,采用实时定量PCR和Western blot法检测克隆细胞 基因和蛋白的表达量,并观察转染后的NIH3T3细胞体外生长状况.结果 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv,经过浓度为200 mg/L的G418工作液筛选出了稳定高表达IP10-EGFRvⅢScFv的细胞系NIH3T3,且其生长状态并未受转染基因的影响.通过荧光检测、实时定量PCR、Western blot法检测到转染72 h后 基因和蛋白表达量最高,和稳定克隆株相比,表达量并无明显差异(P＞0.05).结论构建的新型细胞因子融合蛋白可以在NIH3T3细胞内获得稳定表达,为后期融合蛋白的提取及功能研究打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周毅	华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科	34	299	10.0	16.0
2	赵洪洋	华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科	281	1224	14.0	19.0
3	张方成	华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科	92	493	12.0	14.0
4	姜晓兵	华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科	40	136	7.0	9.0
5	王旋	华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科	18	55	4.0	6.0
6	罗赤星	华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科	1	1	1.0	1.0