版纳微型猪近交系性别决定基因(SRY)原核表达载体的构建及蛋白高效表达

• 作者: 成文敏 曾养志 王淑燕 王配 霍金龙
• 来源期刊: 云南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 版纳微型猪近交系 Y染色体性别决定基因 SRY 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 198-202
• 分类号: S829.91
• 字数: 4205字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-390X(n).2012.02.011

摘要

为了构建版纳微型猪近交系SRY的原核表达载体pET-32a(+)-SRY,并通过诱导使其在大肠杆菌中获得高效表达,研究采用添加限制性内切酶位点的引物特异性扩增SRY,连入pMD19-T simple载体,转化人大肠杆菌DH5α,克隆后提取pMD19-T-SRY阳性重组质粒,使用相同的内切酶同时对pMD19-T-SRY质粒和原核表达pET-32a(+)载体进行酶切,连接后使SRY定向克隆到pET-32a(+)表达载体中.经PCR、酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌感受态DH5α,提取质粒后再次转化大肠杆菌Rosetta( DE3),用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达,并通过15％ SDS-PAGE鉴定.结果显示,不同浓度IPTG诱导的SRY均在大肠杆菌中进行了高效特异性融合表达.