小鼠WNT1基因启动子控制的萤火虫荧光素酶表达载体的构建

• 作者: 余章斌 周泽民 沈惠平 秦大妮 韩树萍
• 来源期刊: 实用儿科临床杂志
• 学科: 医学
• 关键词: WNT1 P19细胞 pGL3-Basic 基因表达载体构建 萤火虫荧光素酶
• 年，卷（期）: 2012,（13）
• 所属期刊栏目: 心血管疾病
• 页码范围: 987-989,993
• 分类号: R725.4
• 字数: 3542字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-515X.2012.13.006

摘要

目的 构建小鼠WNT1基因启动子控制的萤火虫荧光索酶表达载体,并检测其在P19细胞中的表达.方法 采用PCR方法获得WNT1基因启动子最小功能单位和3'UTR区域在内的DNA片段.双酶切后插入到pGL3-Basic载体中构成重组表达载体,使萤火虫荧光素酶报告基因的表达受WNT1启动子控制.将构建的重组表达载体或pGL3-Basic载体分别与内参质粒pRL-SV40(表达海肾荧光素酶)共转染P19细胞,24h后用双荧光检测试剂盒测定萤火虫荧光素酶及海肾荧光素酶活性.结果 重组表达载体经双酶切及测序鉴定证明构建正确,空白对照组(荧光强度比值:2.8204±0.2944)与对照组(荧光强度比值:3.0508±0.3037)及WNT-3' UTR突变组(荧光强度比值:51.4758±0.9837)比较,差异均有统计学意义(Pa＜0.001),该重组表达载体在P19细胞特异性高表达萤火虫荧光素酶.结论 成功构建小鼠WNT1基因启动子控制的萤火虫荧光素酶表达载体,并检测到该载体在P19细胞的特异性表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余章斌	南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科	88	841	16.0	24.0
2	韩树萍	南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科	86	893	17.0	24.0