Cpn0308真核表达载体的构建及对小鼠免疫功能的影响

• 作者: 李萍 贾天军 贾晓晖
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎衣原体 Cpn0308 真核表达 DNA疫苗 免疫反应
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 782-786
• 分类号: R374
• 字数: 4695字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2012.09.004

摘要

目的:构建Cpn0308重组质粒pcDNA3.1/His A-Cpn0308,将重组质粒腹腔注射小鼠后观察小鼠免疫反应变化,以期为进一步研究Cpn0308免疫保护性奠定基础.方法:构建pcDNA3.1/His A-Cpn0308,并用菌落PCR、双酶切、序列测定等多种技术确定其正确性;将重组质粒转染HeLa细胞,间接免疫荧光法检测细胞内蛋白表达情况;重组质粒免疫BALB/c小鼠,一定时间后Western blot 检测血清Cpn0308抗体特异性,间接ELISA法检测小鼠血清中Cpn0308 IgG抗体水平、ELISA试剂盒检测血清中细胞因子.结果:pcDNA3.1/His A-Cpn0308重组质粒构建成功且序列正确;重组质粒转染的HeLa细胞胞浆观察到黄绿色荧光,对照组无荧光;重组质粒组血清抗体A450 x±s为0.343±0.024,pcDNA3.1/His A质粒组为0.174±0.018,PBS组为0.156±0.023,WB结果显示重组质粒组小鼠血清稀释800倍后仍有特异性目的条带出现,对照组不出现;重组质粒组小鼠IFN-γ浓度均值为264 ng/L,IL-4浓度均值为22 ng/L,pcDNA3.1/His A质粒组为:IFN-γ 120 ng/L,IL-4 10 ng/L,PBS组为:IFN-γ99 ng/L,IL-4 9 ng/L.重组质粒组IgG抗体水平和细胞因子水平明显升高,与对照组相比有统计学差异.结论:pcDNA3.1/His A-Cpn0308真核表达重组质粒构建成功,且能够在真核细胞中表达目的蛋白;重组质粒对小鼠进行免疫后,提高了小鼠血清IgG抗体水平和细胞因子水平,为进一步研究Cpn DNA疫苗以及研究该蛋白的生物学功能提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾天军	河北北方学院医学检验学院	100	295	7.0	14.0
2	李萍	河北北方学院医学检验学院	44	100	6.0	8.0
3	贾晓晖	河北北方学院医学检验学院	31	57	5.0	6.0