抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中高效表达与鉴定

• 作者: 乔亚奇 兰丽平 张付凯 潘家荣 王磊
• 来源期刊: 核农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Ω序列 四价抗体 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 农产品辐照研究·食品科学
• 页码范围: 118-122,175
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

为提高抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中可溶性表达量,本研究利用克隆技术得到四价抗体基因sc-sa,将该融合基因连接至表达载体pTO-T7的Ω序列和T7启动子下游,构建成功的表达质粒导入大肠杆菌OrigamiB（DE3）,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定表达产物,Ni亲和层析纯化蛋白,间接非竞争ELISA法测定该四价抗体的亲和力。结果表明在大肠杆菌OrigamiB（DE3）中表达分子量约为46kDa的四价抗体,0.1mmol/L的IPTG在30℃条件下诱导原核表达,外源蛋白占菌体总蛋白含量近50%,纯化后可溶性蛋白纯度在90%以上,ELISA结果显示该抗体与对硫磷结合呈阳性,抗体效价在1∶1×106以上,亲和常数为6.84×108L/mol。与母源抗体和相应单链抗体相比,利用pTO-T7载体四价抗体在大肠杆菌OrigamiB（DE3）中可实现高效表达,且抗体效价和亲和力均得到进一步提高。