VSTM1多克隆抗体的制备和鉴定

• 作者: 宋泉声 李婷 王平章 郭晓欢 韩文玲 马大龙
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 免疫基因组学 细胞因子 白细胞分化抗原 VSTM1 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 1291-1294,1299
• 分类号: R392.11|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的:制备VSTM抗体,鉴定其性能.方法:VSTM1有两种主要的剪接体VSTM-v1和VSTM-v2.前者为膜分子,后者为分泌蛋白,与前者相比后者仅缺少穿膜区.构建VSTM-v2的原核表达载体,诱导表达并纯化带两种不同标签的VSTM-v2重组蛋白,Trx-His-S-VSTM1-v2和GST-VSTM1-v2.用前者免疫家兔制备VSTM1抗血清,ELISA检测效价;后者偶联Sepharose 4B制备免疫亲和层析柱对抗血清进行纯化.通过Western blot法和免疫荧光细胞化学技术,鉴定该抗体的特异性与适用范围.结果:免疫得到兔抗人VSTM1抗血清,效价达到1∶106.纯化后的抗体用于Western blot可特异识别过表达和内源性的VSTM1,并可用于免疫荧光细胞化学技术检测细胞膜表面过表达的VSTM-v1.结论:成功制备了兔抗人VSTM1抗体,具有较高的效价及特异性,可以识别内源性VSTM1并可用于免疫荧光细胞化学技术.