恶性疟原虫复制蛋白PfRPA2的原核表达及多抗制备

• 作者: 刘雅娟 吴英松 周于婷 李宏 李明 李纪良 罗树红 郝文波
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 恶性疟原虫 复制相关蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 644-648
• 分类号: R382.31
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆表达恶性疟原虫复制蛋白PJRPA2亚基,制备多抗,为该蛋白的功能研究奠定基础.方法 PCR扩增目的基因片段,克隆到表达载体pGEX-KG中,构建PfRPA2/pGEX-KG原核表达载体,IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达产物,谷胱甘肽柱纯化蛋白,Westem blot检测其抗原性,以纯化的GST-PfRPA2免疫小鼠,制备抗PfRPA2的多抗,间接ELISA法检测鼠血清效价,Western blot鉴定多抗特异性.结果 成功构建了重组PfRPA2/pGEX-KG原核表达质粒,并在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达,纯化表达产物,制备抗PfRPA2的鼠多抗,效价为10-7,Westem blot证实此抗体可识别恶性疟原虫内与PfRPA2蛋白位置对应的特异性条带.结论 恶性疟原虫复制蛋白PfPA2亚基在大肠杆菌中获得可溶性高效表达,纯化表达产物能诱导小鼠生产能识别天然蛋白的特异性抗体.