恶性疟原虫海南株Pfs40基因原核表达载体的构建和序列分析

• 作者: 余新炳 单志新 方建民 李学荣 马长玲
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 恶性疟原虫 膜相关钙结合蛋白 聚合酶链式反应 克隆 基因测序
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 页码范围: 21-25
• 页数: 5页
• 分类号: R382
• 字数: 4011字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2001.01.006

摘要

目的 构建恶性疟原虫海南(FCC1/HN)株膜相关钙结合蛋白(Pfs40)基因编码区的原核表达载体,测定Pfs40基因编码区的序列,了解该虫株与其它虫株Pfs40基因序列的差异。方法 根据Pfs40基因已知序列设计合成一对引物,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pfs40基因编码区;EcoRⅤ酶切鉴定PCR产物；将Pfs40基因插入原核表达载体PET28a，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，于卡那阳性LB培养平板上筛选阳性克隆，酶切，PCR扩增鉴定；用双脱氧链末端终止法进行测序，应用软件对Pfs40核苷酸及推测氨基酸序列进行分析。结果 PCR扩增获得1032bp的Pfs40基因，EcoRⅤ酶切表明扩增产物正确；重组质粒经双酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子；恶性疟原虫FCC1/HN株与7G8株Pfs40基因核苷酸序列同源性为99.5%，编码氨基酸序列同源性为99.1%。Pfs40理论蛋白质有5个钙结合区EF-hand结构；4个明显的抗原表位区段。结论 从恶性疟原虫基因组DNA中获取Pfs40基因，并成功构建恶性疟原虫FCC1/HN株Pfs40基因编码区的原核表达载体；FCC1/HN株与7G8株Pfs40基因有高度的同源性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单志新	中山医科大学寄生虫学教研室	21	56	5.0	7.0
2	余新炳	中山医科大学寄生虫学教研室	101	467	11.0	17.0
3	李学荣	中山医科大学寄生虫学教研室	17	50	2.0	7.0
4	马长玲	中山医科大学寄生虫学教研室	24	40	4.0	6.0
5	方建民	中山医科大学寄生虫学教研室	12	27	2.0	5.0