ODDD调控EGFP基因的乏氧特异表达载体的构建及其意义

• 作者: 刘磊 方艳秋 蒋永兴 谭岩
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 缺氧 增强型绿色荧光蛋白 氧依赖降解结构域 基因治疗
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 870-875,封2
• 页数: 7页
• 分类号: R733
• 字数: 4095字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建乏氧诱导因子的氧依赖降解结构域(ODDD)调控的乏氧特异性表达荧光报告载体,探索其乏氧调控目的基因表达的可行性.方法:基因重组技术构建含有序列ODDD403-601aa、ODDD549-575aa和其2串联体调控增强型绿色荧光蛋白(EGFP)荧光报告载体.φA细胞中瞬时表达EGFP,应用RT-PCR技术、Westernblotting技术和流式细胞术检测ODDD调控EGFP乏氧特异性表达.结果:克隆得到了ODDD/EGFP表达载体,进行细胞转染实验,在细胞中成功表达EGFP.Western blotting检测,ODDD可以调控EGFP乏氧特异性表达.流式细胞术检测,正常氧浓度下细胞转染pEGFP-ODDD401-603、pEGFP-ODDD549-575和pEGFP-ODDD2(549-575) EGFP的荧光强度分别为(6.06±1.97)％、(11.99±1.13)％和(23.16±2.79)％,低于缺氧条件下EGFP的表达量(P＜0.05).结论:ODDD对靶基因对氧的反应性调节受细胞内的蛋白酶影响；ODDD的调控作用发生在翻译后的蛋白水平,且与细胞内蛋白酶系统功能密切相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭岩	吉林大学第一医院中心实验室	135	608	9.0	17.0
2	方艳秋	吉林省人民医院医学诊治实验中心	110	534	12.0	17.0
3	刘磊	吉林省人民医院医学诊治实验中心	41	132	7.0	9.0
4	蒋永兴	吉林省人民医院医学诊治实验中心	1	0	0.0	0.0