重组腺病毒Ad5/F35-HF2S的构建及其鉴定

• 作者: 冯文莉 李千音 钟梁 高淼 黄峥兰
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 生长因子受体结合蛋白 SH2 FKBP 重组腺病毒 AD-293细胞
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1434-1438
• 分类号: Q782
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带HA标签的重组腺病毒Ad5F35-HF2S.方法 体外合成HA标签DNA双链,以K562细胞cDNA为模板,分别扩增FKBP1、FKBP2和SH2基因,依次亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV-HA中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S,穿梭质粒经Pme I酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAd5/F35在Ad5/F35-BJ5183感受态细胞中同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S,经Pac I酶切线性化后,转染AD-293细胞进行包装、扩增,获得重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,经2轮扩增后,测定病毒滴度；采用PCR及Western blot法检测感染细胞中HF2S基因的转录及蛋白的表达.结果 重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S及重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S经鉴定均构建正确；经包装及2轮扩增后,重组腺病毒Ad5/F35-HF2S病毒滴度可达1013IU/ml;经PCR及Western blot鉴定表明,重组腺病毒携带的HF2S基因能够在AD-293细胞中表达.结论 已成功构建了表达HF2S基因的重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,为研究Grb2-SH2结构域在CML中的基因治疗和作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟梁	重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室	24	100	5.0	8.0
2	冯文莉	重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室	94	473	12.0	18.0
3	黄峥兰	重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室	13	25	3.0	5.0
4	高淼	重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室	5	10	2.0	3.0
5	李千音	重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室	4	43	3.0	4.0