慢病毒-SOX9基因载体的构建及其在小鼠骨髓间充质干细胞中过表达的研究

• 作者: 杨自权 梁大川 白洁玉
• 来源期刊: 中国医疗前沿
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 SOX9 慢病毒 软骨分化
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 9-11,2
• 分类号: R392.1
• 字数: 3675字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5552.2012.09.0005

摘要

目的 构建慢病毒-SOX9 基因载体并转染小鼠骨髓间充质干细胞以得到用于基因治疗软骨损伤的种子细胞.方法 自Gene bank中获得小鼠SOX9 的cDNA序列(NM_011448.4),设计两端引物,并在其两端分别引入Xhol和BamHI 酶切位点序列,用RT-PCR法扩增出SOX9cDNA,连入慢病毒表达载体,构建慢病毒-SOX9-EGFP(Lenti-SOX9-EGFP) 重组体.通过Real time 定量PCR法测定滴度后使用Lenti-SOX9-EGFP转染小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs).采用免疫荧光和Westernblotting鉴定SOX9 在mBMSCs中的表达.结果 PCR(445bp)、DNA测序、Western blotting(83KDr)检测证明Lenti-SOX9-EGFP载体构建成功.经Real time定量PCR法测定的病毒滴度为2×108TU/ml.Lenti-SOX9-EGFP 转染mBMSCs 72h后经免疫荧光检测约80% 的mBMSCs可表达SOX9.Western blotting也证明了SOX9 在经SOX9 基因转染的mBMSCs内稳定表达.结论 获得了稳定表达SOX9 的mBMSCs,为基因治疗关节软骨损伤奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨自权	山西医科大学第二临床医学院骨科	59	337	10.0	13.0
2	白洁玉	山西医科大学第二临床医学院骨科	8	37	4.0	6.0
3	梁大川	山西医科大学第二临床医学院骨科	8	34	4.0	5.0