病程相关蛋白-1a多克隆抗体的制备与应用

• 作者: 刘家驹 刘开兴 宋宝安 李向阳 杨松 毕亮 王贞超 陈卓
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 病程相关蛋白-1a 序列分析 多肽合成 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（21）
• 所属期刊栏目: 生物技术—研究报告
• 页码范围: 174-182
• 分类号: S1
• 字数: 5978字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6850.2012.21.032

摘要

为获得效价高和选择性强的PR-1a抗体.根据NCBI GenBank中普通烟PR-1a一级结构信息,采用Blastn、Blastx和Expasy等软件进行序列同源性分析,获得1段序列特异性多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法获得目的多肽,采用HPLC和LC-MS测定目的多肽的浓度和分子量.结果表明:目的多肽纯度达93.92％、分子量为2088.17;采用碳化二亚胺法制备获得Pep-KLH,并通过免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,采用间接-ELISA和Western blotting测定其抗体效价和特异性,结果表明:抗血清在1:32000条件下,抗血清的吸光值(OD)约为1.0；经Western blotting试验表明:抗血清和多克隆抗体可特异性识别烟草叶片组织内的PR-1a;同时,试验采用系统性获得性的免疫激活剂-BTH作用普通烟K-326,对作用后的0、6、12、24、48、76、144、96 h的烟草叶片总蛋白进行间接-ELISA,发现:BTH作用普通烟K-326144h后,PR-1a蛋白表达呈上调趋势；同时采用半定量RT-PCR试验也同样证实了BTH可诱导PR-1a基因表达上调,其表达上调趋势与间接-ELISA的研究结果相似.表明采用该方法制备的PR-1a多肽抗体具有较高的特异性和灵敏度,可用于免疫诱导剂等方面的研究.