表达结核分枝杆菌休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白重组耻垢分枝杆菌的构建与鉴定

• 作者: 康健 张薇 徐志凯 柏银兰 王丽梅 王平 罗泰来 郝彦斐
• 来源期刊: 科学技术与工程
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 休眠相关抗原 Rv2031c Rv2626c 耻垢分枝杆菌
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 医药卫生
• 页码范围: 2014-2018,2022
• 分类号: R378.911
• 字数: 3148字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-1815.2012.09.006

摘要

利用大肠埃希菌—分枝杆菌穿梭表达载体pDE22,构建能够表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.s).采用聚合酶链反应(PCR)方法,从MTB H37Rv基因组DNA中扩增MTB休眠相关抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段并克隆入pMD18-T载体.序列测定正确后分别亚克隆入大肠埃希菌—分枝杆菌穿梭表达载体pDE22.将重组载体pDE22-Rv2031 c-Rv2626c电穿孔导入M.s,42℃热诱导表达目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western-blot分析.利用PCR方法扩增获得MTB休眠相关抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段,大小分别为435 bp和480 bp.基因测序与Genebank公布的基因序列完全一致.SDS-PAGE分析结果表明重组载体pDE22-Rv2031c-Rv2626c电穿导入M.s后能够特异性表达目的蛋白,大小约为35 kDa,与理论值相符.Western-blot 鉴定结果表明抗Rv2031c和抗Rv2626c的单克隆抗体均能够与目的蛋白发生特异性的反应,大小相一致.成功构建表达MTB休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白的重组M.s,并命名为Rv2031c-Rv2626c-rM.s,为其用于结核新型疫苗的研究奠定了基础.