热纤梭菌内切葡聚糖酶在酿酒酵母细胞表面上展示研究

• 作者: 姚淑敏 谭静利
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 热纤梭菌 内切葡聚糖酶基因 酵母表面展示系统
• 年，卷（期）: 2012,（14）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 8024-8026,8030
• 分类号: S182
• 字数: 3401字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2012.14.006

摘要

[目的]对热纤梭菌内切葡聚糖酶进行酿酒酵母细胞表面展示研究,探索降低纤维素酶成本和提高酶活的方法.[方法]通过提取产内切葡聚糖酶的热纤梭菌总DNA,根据热纤梭菌内切葡聚糖酶基因序列和酿酒酵母表面展示质粒载体pYDl上的多克隆位点设计引物,克隆内切葡聚糖酶目的基因,将其连接到酵母表面展示质粒载体pYDl上,构建重组质粒pYDl - GelA,并将其转化入酿酒酵母菌株EBY100中,经诱导表达后,测定表达产物的最适温度和pH,并分析影响其活性的金属离子种类和浓度.[结果]PCR扩增获得1400bp左右的内切葡聚糖酶CelA基因片段,并成功构建了该基因与酵母表面展示质粒载体pYDI的重组质粒pYDl - CelA.重组质粒转化酿酒酵母菌株EBY100后,在鉴定培养基上测定透明圈的大小得出最佳诱导时间为60 h.表达产物性质的研究结果显示其最造反应温度为50℃,在pH4.6时酶活性相对较高.[结论]该研究结果为后续对纤维素酶的进一步研究、改造、大量生产及应用奠定了一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚淑敏	曲阜师范大学生命科学学院	35	146	6.0	11.0
2	谭静利	曲阜师范大学生命科学学院	2	1	1.0	1.0