靶向DENN-SV基因的shRNA真核表达载体的构建

• 作者: 冯卓 张秀梅 李锦成 骆振华
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: DENN-SV 短发夹RNA RNA干扰 MCF-7细胞系
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 36-40
• 页数: 5页
• 语种: 中文

摘要

该研究根据DENN-SV序列及shRNA设计原则,设计四个靶点序列,退火后用DNA重组技术与pRNAi-U6.1/Neo空载体连接,转化到感受态E.coli中.扩增菌株,抽提质粒,进行酶切、DNA测序鉴定.将重组的真核表达载体转染人乳腺癌MCF-7细胞并使用RT-PCR及Westem blot检测其抑制DENN-SV mRNA表达的效率,以MTT法绘制生长曲线.测序结果与设计序列相同,并已成功转染进入人乳腺癌MCF-7细胞,可见GFP(绿色荧光蛋白)表达,且都具有抑制作用(P＜0.01),DS-1组的抑制效果最好；MTT法绘制生长曲线结果表明,实验组经该载体转染后细胞增殖程度显著减少(P＜0.05).该研究应用RNAi技术成功构建了小干扰RNA重组体,为进一步研究乳腺癌基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李锦成		28	118	6.0	10.0
2	张秀梅		32	63	4.0	6.0
3	骆振华		3	1	1.0	1.0
4	冯卓		1	0	0.0	0.0