牛布鲁氏菌毒力基因Virb8间接ELISA检测方法的建立与应用

• 作者: 丁家波 何洪彬 张亮 张剑 杨宏军 马卫明
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 布鲁氏菌 Virb8 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2013,（16）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 3460-3469
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.16.017

摘要

[目的]布鲁氏菌virb8蛋白是布鲁氏菌的重要毒力因子,本研究拟构建含布鲁氏菌Virb8基因的原核表达载体,利用纯化蛋白作为包被抗原,建立检测牛布鲁氏菌血清抗体的间接ELISA方法(iELISA).[方法]根据GenBank中的牛型布鲁氏杆菌Virb8序列,设计一对引物,以布鲁氏菌疫苗株S2全基因组DNA为模板扩增Virb8的基因,将目的基因克隆入PEASY-T3,经测序正确后,与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a-Virb8,转化E.coliBL21(DE3),诱导表达融合蛋白pET-32a-Virb8,经SDS-PAGE及Western-blot分析鉴定后,采用Ni-NTA Spin Kit纯化目的蛋白,利用所建立的iELISA方法对235个临床奶牛血清样本进行检测,并与虎红平板凝集实验进行比较.[结果]成功构建了含Virb8的表达载体,经多次对表达条件的优化,大量表达了目的蛋白,建立的iELISA方法具有稳定、灵敏的特点,与虎红平板凝集试验的符合率可达97.02％.[结论]所建立的iELISA方法是一种有效的牛布鲁氏菌病血清学诊断的方法,为进一步研究其免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨宏军	山东省农业科学院奶牛研究中心	52	203	9.0	11.0
2	马卫明	山东农业大学动物科技学院	38	262	8.0	15.0
3	何洪彬	山东省农业科学院奶牛研究中心	59	320	10.0	13.0
4	丁家波		70	579	14.0	21.0
5	张亮	山东省农业科学院奶牛研究中心	17	44	3.0	6.0
6	张剑	山东省农业科学院奶牛研究中心	6	129	5.0	6.0