HLA-B2704重链胞外功能区基因片段的克隆表达及其生物学功能的初步鉴定

• 作者: 于坤 代东发 刘楠 奚永志 孙玉英 梁飞 袁方 赵晓 郝玉娜
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: HLA-B27 基因克隆 蛋白表达 强直性脊柱炎
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 161-164
• 分类号: Q78
• 字数: 3655字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.02.004

摘要

目的:克隆及可溶性表达 HLA-B*2704重链胞外功能区,并对其生物学功能进行初步鉴定.方法:以HLA-B 位点全长 cDNA 为模板,用 PCR-SSP 方法扩增 HLA-B*2704重链胞外区 cDNA,经测序鉴定后与 pET32a 可溶性核表达载体构建其重组核表达系统,并在大肠杆菌 BL21中表达,采用 Western 印迹及微量淋巴细胞毒阻断实验初步鉴定该蛋白的特异性及其生物学特性.结果:扩增出 HLA-B*2704重链胞外功能区 cDNA 片段,构建的HLA-B*2704 cDNA-pET32a 可溶性核表达载体可在大肠杆菌 BL21表达系统中得到较好表达,表达量约占菌体总蛋白的40%;通过 Western 印迹鉴定了表达蛋白的特异性;通过微量淋巴细胞毒阻断实验发现该重组蛋白具有生物活性并可特异性阻断 HLA-B27阳性细胞的微量淋巴细胞毒反应.结论:在大肠杆菌中表达了具有生物学活性的HLA-B*2704重链胞外功能区,为强直性脊柱炎的机理研究及特异性阻断药物的筛选提供了实验基础和新的靶标.