活的非可培养状态副溶血性弧菌实时荧光逆转录PCR检测方法的建立及其毒力研究

• 作者: 凌莉 刘静宇 易敏英 胡科锋 邓翼惠 陈碧玲
• 来源期刊: 中国食品卫生杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 副溶血性弧菌 活的非可培养 实时荧光逆转录PCR 毒力基因 食源性致病菌
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 309-315
• 分类号: R155.5|TS201.6
• 语种: 中文

摘要

目的 建立检测活的非可培养(VBNC)状态副溶血性弧菌的荧光逆转录PCR方法并研究其毒力基因表达.方法 将副溶血性弧菌AS079菌株添加到陈化海水中,4℃冰箱内培养,使其进入VBNC状态,针对其管家基因、鉴定基因和毒力基因分别设计实时荧光逆转录PCR引物,通过不同的PCR反应程序和引物浓度组合试验,摸索最佳反应体系条件,用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力研究.结果 用所建立的检测VBNC状态副溶血性弧菌的实时荧光逆转录PCR方法,对接种于陈化海水培养的不同时期的AS079副溶血性弧菌进行荧光定量逆转录PCR扩增,结果显示,随着培养时间的延长,毒力基因tdh2和鉴定基因toxR表达水平持续下降,但即使细菌进入VBNC状态,这两个基因也能够得到很好的扩增,说明以toxR基因和tdh2基因对进入VBNC状态的副溶血性弧菌进行检测和毒力研究方法可行.灵敏度试验表明,鉴定基因toxR的最低检测限可达到48 cfu/ml,研究毒力基因tdh2的表达需要细菌浓度至少为4.8×102cfu/ml,同时试验证明此方法与其他相近食源性致病菌无交叉反应.结论 该实时荧光逆转录PCR方法检测快速、特异性强、敏感度高,适用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	凌莉	广东出入境检验检疫局技术中心	19	73	6.0	7.0
2	陈碧玲	广东出入境检验检疫局技术中心	8	22	3.0	4.0
3	刘静宇	广东出入境检验检疫局技术中心	13	56	6.0	7.0
4	易敏英	广东出入境检验检疫局技术中心	7	30	3.0	5.0
5	邓翼惠		1	7	1.0	1.0
6	胡科锋	广东出入境检验检疫局技术中心	2	13	2.0	2.0