pIRES-PML-RARα重组载体的构建和表达研究

• 作者: 周羽竝 岑东芝 李扬秋 杨力建 胡刚 陈少华
• 来源期刊: 沈阳医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: PML-RARα融合基因 急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学与临床医学研究
• 页码范围: 69-72
• 页数: 4页
• 分类号: R733.71
• 字数: 2371字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-2344.2013.02.002

摘要

目的:采用不同长度的PML-RARα融合基因片段与pIRES质粒构建真核表达载体,并检测其在真核细胞中的表达.方法:利用逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)从NB4细胞的RNA中分别扩增出包含PML-RARα基因融合点的长度为245 bp和384 bp的基因片段,并将不同长度的基因片段分别克隆到pIRES质粒中,通过酶切和测序验证重组质粒的正确性.将重组质粒转染K562细胞,通过RT-PCR和实时荧光定量PCR检测该质粒在真核细胞中的转录.结果:NheⅠ/MluⅠ双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα融合基因片段,测序结果证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确.将构建的pIRES-PML-RARα质粒转染K562细胞后经RT-PCR和实时荧光定量PCR鉴定表明,插入到重组质粒中的PML-RARα基因能够在真核细胞中进行正常转录.结论:成功构建了含有不同长度的PML-RARα基因的真核表达载体,该载体能够在真核细胞中正常转录,为研发DNA疫苗用于治疗急性早幼粒细胞白血病提供重要资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李扬秋	暨南大学医学院血液病研究所	222	807	12.0	17.0
5	周羽竝	暨南大学医学院生物化学教研室	45	195	7.0	11.0
6	杨力建	暨南大学医学院血液病研究所	151	579	10.0	16.0
7	陈少华	暨南大学医学院血液病研究所	170	604	10.0	15.0
8	岑东芝	暨南大学医学院血液病研究所	16	41	4.0	4.0