PML-RARα融合基因相关蛋白原核表达载体的构建、表达和纯化

• 作者: 张国元 徐磊 杜琴 王东生 蒋春萍 蔡嘉镜
• 来源期刊: 国际医药卫生导报
• 关键词: PML-RARα融合基因 重组质粒 蛋白表达 蛋白纯化 急性早幼粒细胞白血病 抗体制备
• 年，卷（期）: 2017,（13）
• 所属期刊栏目: 科研课题
• 页码范围: 1998-2001,2025
• 页数: 5页
• 字数: 3162字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2017.13.004

摘要

目的 构建PML-RAR o[融合基因相关重组表达质粒,在大肠埃希菌中表达可溶性蛋白并进行纯化.方法 利用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)以PML-RAR α全长质粒为模板分别扩增出长度均为1 200 bp的PML和RAR o[序列,并将它们分别插入PET32a(+)质粒中,构建重组表达质粒,化学法转化大肠埃希菌DH5α进行克隆,菌落PCR筛选阳性转化子,双酶切和测序鉴定重组质粒的正确性.正确重组的表达质粒分别命名为PML-Flag-PET32a(+)和Flag-RARα-PET32a(+).将正确重组的表达质粒转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用表达蛋白的组氨酸“标签”(His-tag)进行Ni2+-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化蛋白质.结果 PCR扩增获得目的基因,重组表达质粒经EcoRI/HindⅢ双酶切和测序鉴定证明构建正确.转化感受态BL21(DE3)并经诱导后得到高效表达,SDS-PAGE和Western blotting显示纯化蛋白为目的蛋白.结论 成功构建重组表达质粒,并经诱导表达后可纯化出目的蛋白,为进一步的抗体制备等实验奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张国元	川北医学院附属医院检验科	117	493	11.0	15.0
2	徐磊	川北医学院转化医学研究中心	8	31	3.0	5.0
3	蒋春萍	川北医学院医学检验系	2	5	1.0	2.0