线粒体转录复合物相关蛋白原核表达与纯化

• 作者: 刘光 刘德培 杨瑞锋 石秉炀
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 线粒体转录因子A 线粒体转录因子B1 线粒体转录因子B2 融合蛋白 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 638-643
• 分类号: Q782
• 语种: 中文
• DOI: 10.3881/j.issn.1000-503X.2011.06.011

摘要

目的 获取人线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体转录因子B1(TFB1M)、线粒体转录因子B2(TFB2M)基因片段,高效表达和纯化带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白.方法 设计引物扩增得到TFAM、TFB1M、TFB2M的cDNA片段,通过引入的酶切位点克隆至表达载体pET42a,构建重组表达载体,并导入E.coli BL21宿主菌中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组的GST融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖珠纯化表达产物,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定.结果 获得pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M表达质粒,测序结果与GenBank的基因序列一致.SDS-PAGE分析结果显示,重组GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白分别在相对分子质量56000、67000、69000处出现特异性蛋白条带,经GST亲和层析纯化后,得到高纯度的融合蛋白.结论 成功构建了基因重组体pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M,制备了GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘德培	中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	32	162	7.0	11.0
2	刘光	中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	2	3	1.0	1.0
3	杨瑞锋	中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	1	3	1.0	1.0
4	石秉炀	中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	1	3	1.0	1.0