猪NF-kappaB p65/p50基因克隆、序列鉴定及实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 廖春燕 徐志文 朱玲 王潇娣 郭万柱 黄仆
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 核转录因子-kappaB 序列分析 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 1288-1296
• 页数: 9页
• 分类号: S828|Q781
• 字数: 6678字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.08.017

摘要

NF-κB信号通路在病毒感染、免疫损伤性疾病、肿瘤疾病中发挥重要作用,其活化水平常作为机体免疫应答水平、疾病发展进程的检测指标.为获得猪NF-κB p65/p50基因序列特征并建立体外定量检测其表达水平的实时荧光定量PCR方法,作者对猪NF-κB p65 ORF和成熟p50编码区进行RT-PCR扩增、克隆、测序及生物信息学分析;设计特异性荧光定量引物,建立检测p65、p50实时荧光定量PCR方法.结果显示:所扩增的猪NF-κB p65ORF长1662 bp,编码553 aa,成熟p50编码区长1653 bp,编码551 aa;与不同动物的p65、p50序列相似性均较高;56.5％ p65位于细胞核内,78.3％p50存在于细胞质中,p65、p50均无信号肽及跨膜区.荧光定量结果表明:起始模板与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.999,扩增效率均在95％左右;敏感性高,初始模板的检出下限达到101 copies·μL-1;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内变异系数均小于5‰.本试验为进一步研究猪NF-κB p65/p50生物学功能及其在猪相关疾病发生发展中表达量变化奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱玲	四川农业大学动物生物技术中心	151	499	13.0	17.0
2	郭万柱	四川农业大学动物生物技术中心	166	1465	21.0	28.0
3	徐志文	四川农业大学动物生物技术中心	184	909	15.0	20.0
7	王潇娣	四川农业大学动物生物技术中心	9	13	2.0	3.0
8	黄仆	四川农业大学动物生物技术中心	5	1	1.0	1.0
9	廖春燕	四川农业大学动物生物技术中心	5	27	3.0	5.0