脆壁克鲁维酵母基因置换技术的建立

• 作者: 卢松冲 吕洋 张旭 徐欣 曹宇婷 李杰 李璐
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 脆壁克鲁维酵母 电击转化 限制内切酶介导 同源重组 基因置换
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 53-58
• 分类号: Q-31
• 字数: 3862字
• 语种: 中文

摘要

以中性乳糖酶生产菌脆壁克鲁维酵母为材料,构建以kan基因为筛选标记、以脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因上游调控区为同源臂的质粒pPkan.将质粒pPkan电击转化脆壁克鲁维酵母,对受体菌生长时期、电场强度、电击后培养时间等条件进行优化.结果表明,以OD600为0.8的脆壁克鲁维酵母为受体、电压1.5 kV、电场强度为7.5 kV·cm-1、电击后培养时间为90 min,可获得较高的转化率,最高转化效率为2.37×102转化子·μgDNA.在电击转化的同时加入限制性内切酶10μL,对电击转化的转化率无显著影响.经PCR筛选证实87.5%的转化子为同源重组,从而建立一套有效的脆壁克鲁维酵母基因置换技术.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李杰	东北农业大学生命科学学院	193	1723	20.0	30.0
2	张旭	东北农业大学生命科学学院	47	287	9.0	15.0
3	李璐	东北农业大学生命科学学院	31	136	6.0	11.0
4	吕洋	东北农业大学生命科学学院	4	20	2.0	4.0
5	卢松冲	东北农业大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
6	徐欣	东北农业大学生命科学学院	3	3	1.0	1.0
7	曹宇婷	东北农业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0