大豆高盐胁迫下根部组织酵母双杂交文库的构建与分析

• 作者: 何晓兰 刘晓庆 卫陪陪 张大勇 徐照龙 许玲 黄益洪
• 来源期刊: 上海农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大豆 根 酵母双杂交文库 耐盐性 互作蛋白
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 20-23
• 页数: 4页
• 分类号: S565.1|Q78
• 字数: 2940字
• 语种: 中文

摘要

为了高效研究大豆耐非生物胁迫的分子调控网络,运用SMART(Switching Mechanism at 5'End ofthe RNA Transcript)与DSN (Duplex-Specific Nulease)相结合的技术构建了栽培大豆高盐胁迫下根部组织的酵母双杂交cDNA文库.提取高质量的总RNA,利用Oligo (dT)16引物反转录合成cDNA后,经DSN处理,然后利用Advantage 2聚合酶进行长片段PCR扩增,电泳检测显示,产物均一,无高丰度条带,片段范围在0.75～5.00 kb;RT-PCR结果显示,GmActin基因在均一化后表达明显降低,表明均一化效果较好;最后通过SMART同源重组交换技术在酵母菌株Y187中构建了酵母双杂交所需的cDNA文库.文库质量检测结果表明:cDNA文库的总独立克隆数为5.61×106c fu、文库滴度为3.4×1010cfu/mL、重组率大于90％、插入片段长度为0.5～3.0 kb,主要集中在1.0 kb左右.