建鲤内参基因β-actin的实时荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 任洪涛 俞菊华 唐永凯 徐跑 李建林 李红霞 董在杰
• 来源期刊: 浙江农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 建鲤 内参基因 β-actin 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 31-36
• 页数: 6页
• 分类号: S965.116
• 字数: 3065字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1524.2013.01.06

摘要

β-actin在真核细胞的生理过程中起着重要的作用,其表达范围广、表达量恒定,常作为内参基因应用于real time PCR中.本文通过RT-PCR克隆出建鲤(Cyprinus carpio var.jian) β-actin的部分cDNA序列,其长度为424 bp,翻译成138个氨基酸,计算的蛋白质分子量为15.4 ku.氨基酸同源性分析显示,建鲤β-actin与斑马鱼(Danio rerio)相似性最高,为99.3％.与其他鱼的相似性也较高,为97.8％～98.6％.同时也克隆出了建鲤β-actin相应的DNA序列,其长度为590 bp.cDNA和DNA的序列比对显示克隆出的建鲤β-actin含有2个内含子,设计一对跨越内含子的引物,采用SYBR Green Ⅰ染料建立了real time PCR方法.以肝脏cDNA为标准品,建立了标准曲线,并进行了溶解曲线分析.结果表明,所建立的方法具有特异性强、相关系数高、线性范围广等优点,可应用于建鲤的功能基因表达研究.