人Runx3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 余永胜 奚敏 张毅 江红 汤正好 臧国庆
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 慢性乙型肝炎 Th1细胞 Th2细胞 Runx3 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 409-413
• 分类号: R512.6+2
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人Runx3基因重组慢病毒载体.方法 PCR扩增Runx3基因,应用In-Fusion技术将Runx3基因PCR扩增产物交换进入线性化慢病毒载体pGC-FU以构建重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3,并转化大肠杆菌DH5 α感受态细胞.对长出的阳性克隆进行PCR鉴定,并进行测序和比对分析.将构建成功的重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3与包装质粒pHelper 1.0、包膜质粒pHelper 2.0共转染293T细胞进行病毒包装.荧光显微镜下观察重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3转染293T细胞后细胞内绿色荧光表达情况.Western blot检测Runx3与EGFP融合蛋白表达情况.实时定量PCR测定病毒滴度.结果 重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3经测序和比对分析证实目的基因序列正确.三质粒共转染293T细胞后荧光显微镜下观察细胞内可见明显的绿色荧光.Western blot证实Runx3与EGFP融合蛋白在293T细胞内稳定表达.浓缩病毒后测定滴度为2.0×108TU/ml.结论 成功构建携带人Runx3基因的重组慢病毒载体pGC-FU-Runx3,为进一步研究Runx3过表达对慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞分化的影响奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汤正好	上海交通大学附属第六人民医院感染病科	85	349	10.0	14.0
2	江红	上海交通大学附属第六人民医院感染病科	41	303	11.0	16.0
3	奚敏	上海交通大学附属第六人民医院感染病科	34	149	8.0	10.0
4	臧国庆	上海交通大学附属第六人民医院感染病科	119	570	13.0	18.0
5	余永胜	上海交通大学附属第六人民医院感染病科	86	301	9.0	12.0
6	张毅	苏州大学医学部	4	5	2.0	2.0