重组腺病毒载体AdOX40Ig的构建、表达及相关体外实验

• 作者: 张守亮 朱伟 林建扬 赵媛媛 陈志红 魏法星
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人OX40-IgG1融合基因 腺病毒载体 OX40/OX40L途径 HL-7702肝细胞 器官移植
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 12-16
• 页数: 5页
• 分类号: R967
• 字数: 3526字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建并鉴定含人OX40-IgG1融合基因的重组腺病毒载体,并感染人肝HL-7702细胞,筛选出最佳感染剂量并检测OX40Ig的表达情况,为进一步用于器官移植后的抗排斥治疗奠定基础.方法:根据基因库公布的人OX40和hlgGl Fc片断序列设计特定引物,通过聚合酶链反应扩增并鉴定后,酶切插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中.随后与pAdeasy-1腺病毒质粒以氯化钙法共转化BJ5183感受态细胞,重组质粒经鉴定正确后,大量扩增为腺病毒载体.再经293A细胞包装、扩增并纯化后感染HL-7702肝细胞,筛选出最佳感染剂量,并采用间接免疫荧光法检测其中外源性OX40lg基因的表达,采用ELISA法测定肝HL-7702细胞上清中OX40Ig蛋白的含量.结果:转移质粒pTOX40Ig经酶切及测序鉴定正确.重组腺病毒质粒经酶切鉴定正确,并成功转染了293A细胞.得到的病毒液经纯化扩增后进一步感染肝HL-7702细胞,经筛选,10 MOI为最佳感染剂量,并且可以检测到OX40Ig目的基因及其蛋白的表达.结论:成功构建了重组腺病毒载体AdOX40Ig,并且可在肝细胞HL-7702中表达相应的目的基因及蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱伟	江苏大学基础医学与医学技术学院	121	743	14.0	21.0
2	张守亮	江苏大学附属人民医院普外科	11	26	3.0	5.0
3	陈志红	江苏大学附属人民医院普外科	23	52	4.0	6.0
4	林建扬	江苏大学附属人民医院普外科	8	13	2.0	3.0
5	魏法星	江苏大学附属人民医院普外科	8	18	2.0	4.0
6	赵媛媛	江苏大学基础医学与医学技术学院	6	9	2.0	2.0